附件4：

體外診斷試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則

——金標(biāo)類診斷試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則

（征求意見稿）

本類金標(biāo)試劑是指應(yīng)用膠體金免疫技術(shù)，采用膠體金標(biāo)記的抗體或抗原包被于玻璃纖維膜、聚脂膜或其他載體，將相關(guān)抗原或抗體固相連接在硝酸纖維膜，應(yīng)用層析法的原理檢測(cè)樣品中的抗原或抗體的快速檢測(cè)試劑。本技術(shù)指導(dǎo)原則適用于第三類體外診斷試劑中金標(biāo)試劑的生產(chǎn)及質(zhì)量控制，鑒于本類診斷試劑所應(yīng)用的原理、方法、分類等的復(fù)雜性，本指導(dǎo)原則難以一一涵蓋，僅從試劑的主要原材料、制備工藝、半成品及成品提出質(zhì)量控制要點(diǎn)，其他診斷試劑可作參考。國(guó)家藥品監(jiān)督管理部門將根據(jù)科學(xué)技術(shù)發(fā)展的需要對(duì)本技術(shù)指導(dǎo)原則適時(shí)組織修訂。

一、基本原則

（一）研制、生產(chǎn)用的各種原料、輔料應(yīng)當(dāng)制定相應(yīng)的質(zhì)量指標(biāo)，并應(yīng)符合有關(guān)法規(guī)的要求。

（二）診斷試劑的生產(chǎn)必須按《藥品生產(chǎn)和質(zhì)量管理規(guī)范》組織生產(chǎn)；企業(yè)應(yīng)具備相應(yīng)的專業(yè)技術(shù)人員，相適應(yīng)的儀器設(shè)備和生產(chǎn)環(huán)境。

（三）診斷試劑的研制應(yīng)當(dāng)按照科學(xué)、規(guī)范的原則組織研發(fā)，各反應(yīng)條件的選擇和確定應(yīng)符合基本的科學(xué)原理。

（四）研制生產(chǎn)過(guò)程中所用的材料及工藝，應(yīng)充分考慮可能涉及的安全性方面的事宜。

二、原材料質(zhì)量控制

（一）主要生物原料

與生產(chǎn)的產(chǎn)品質(zhì)量最密切相關(guān)的生物原料包括各種活性抗原、重組抗原、單克隆杭體、多克隆抗體以及多肽類生物原科。這類原料可用于膠體金標(biāo)記、包被硝酸纖維膜及用于制備質(zhì)控線的抗原或抗體等。

1、外觀

肉眼觀察，大部分生物原料為澄清透明的液體，不含異物，渾濁或搖不散的沉淀，或者為白色粉末，不含有其他顏色的雜質(zhì)，特殊生物原料應(yīng)具備相應(yīng)外觀標(biāo)準(zhǔn)。

2、純度和分子量

主要通過(guò)SDS-PAGE電泳和電泳結(jié)果掃描儀進(jìn)行檢測(cè)，也可用其他適宜的方法，如高效液相法等。根據(jù)所檢測(cè)生物原料的分子量選擇適宜丙烯酸胺凝膠濃度進(jìn)行電泳。一般情況下，每個(gè)電泳道加樣量為5mg，同時(shí)用已知分子量標(biāo)準(zhǔn)作參照，采用合適的電泳電流和電泳時(shí)間；電泳后的凝膠可用考瑪氏亮藍(lán)染色或銀染法染色。染色后的凝膠用電泳掃描儀分析原料的純度和分子量。作為免疫診斷試劑用生物原材料，用銀染法染色后，純度一般都要大于90％，用考瑪氏亮藍(lán)染色后，純度一般都要大于95％。

3、蛋白濃度

蛋白濃度可通過(guò)Lowry法、208nm光吸收法、雙縮脲方法等進(jìn)行檢測(cè)。

4、效價(jià)

效價(jià)的測(cè)定一般根據(jù)蛋白含量測(cè)定結(jié)果通過(guò)倍比稀釋法進(jìn)行，效價(jià)應(yīng)達(dá)到規(guī)定的要求。

5、功能性實(shí)驗(yàn)

功能性實(shí)驗(yàn)是指標(biāo)生物原料用于試劑盒試劑實(shí)際生產(chǎn)中的情況，一般考查該原料使用后的試劑靈敏度、特異性和穩(wěn)定性。用于制備制控線的抗原或抗體可采用其他適宜方法進(jìn)行功能性實(shí)驗(yàn)。

（二）生物輔料

生物輔料指的是在生產(chǎn)過(guò)程中作為蛋白保護(hù)劑用途的一類生物原料，主要包括牛血清白蛋白材料等。這些生物原料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合2000年版的《中國(guó)生物制品主要原輔材料質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)》上規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)要求，并且要適合于企業(yè)的生產(chǎn)。

牛血清白蛋白

外觀：應(yīng)為淺黃色凍干粉末，無(wú)吸潮，無(wú)結(jié)塊，無(wú)肉眼可見的其他雜質(zhì)顆粒。

溶解性：將牛血清白蛋白配成10％溶液，溶解時(shí)間應(yīng)不大于15分鐘。1％水溶液的pH值：6.5~7.1；1％水溶液OD403值：＜0.15。

總蛋白含量：用雙縮脈方法來(lái)測(cè)定，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為≥95％。

硫酸銨含量：納氏試劑法測(cè)定，通過(guò)用標(biāo)準(zhǔn)硫酸銨曲線可查出硫酸銨含量，其標(biāo)準(zhǔn)為≤0.1%。

尿素含量：采用二乙酸一肟法測(cè)定，通過(guò)用標(biāo)準(zhǔn)尿素曲線可查出尿素含量，其標(biāo)準(zhǔn)為≤0.1%。

總蛋白中的BSA含量：采用硝酸纖維素膜電泳法。其標(biāo)準(zhǔn)為95％。

BSA的凈含量：總蛋白含量乘總蛋白中的BSA含量，其標(biāo)準(zhǔn)為≥90％。

功能性試驗(yàn)：10％作為樣本進(jìn)行酶聯(lián)免疫測(cè)定，不得出現(xiàn)特異性反應(yīng)。

（三）化學(xué)原材料

參照《中國(guó)生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)》分析純級(jí)別檢定。主要的檢測(cè)指標(biāo)包括一些基本的一般鹽類檢測(cè)、溶液PH值檢測(cè)。溶解情況的檢測(cè)、干燥失重的檢測(cè)。熾灼殘?jiān)取?/p>

1、無(wú)機(jī)類

主要包括有氯金酸、氯化鈉、磷酸氫二鈉。磷酸二氯鈉、碳酸鈉、碳酸氫鈉等。

2、有機(jī)類

主要包括有枸櫞酸、枸櫞酸鈉、蔗糖、吐溫20、乙二胺四乙酸二鈉、三羥基氨基甲烷、氨基吡啉、溴化鉀、氫氧化鈉、葡萄糖、硫酸銨、硫氫酸鉀等。

（四）其他原輔料

1、硝酸纖維素膜

硝酸纖維素膜應(yīng)具有厚度、孔徑大小等要求，毛細(xì)遷移速度，韌性(切割時(shí)膜破損引起的廢品率）、均一性（厚度偏差范圍、毛細(xì)遷移速度偏差范圍）應(yīng)達(dá)到規(guī)定的要求。

2、玻璃纖維或聚酯纖維膜及濾紙

玻璃纖維或聚酯纖維膜及濾紙應(yīng)具有厚度、毛細(xì)遷移速度、重量等要求，均一性（厚度偏差范圍，毛細(xì)遷移速度偏差范圍，重量偏差范圍）應(yīng)達(dá)到規(guī)定的要求。

3、玻璃纖維膜

適用于全血檢測(cè)的金標(biāo)試劑，過(guò)濾紅細(xì)胞所用玻璃纖維膜或其他材料具有不吸附蛋白質(zhì)的特點(diǎn)，應(yīng)具有厚度、孔徑大小等要求。

4、塑料襯片

塑料襯片應(yīng)具有厚度、硬度（切割時(shí)一次未能整條切下的百分率）、尺寸（與標(biāo)識(shí)吻合）、粘性（切割時(shí)造成玻璃纖維與塑料襯片分離的百分率）等要求。

5、其他

粘膠紙、鋁箔袋、說(shuō)明書、包裝外盒、瓶子和干燥劑等應(yīng)建立相應(yīng)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

三、試劑盒的制備

本類試劑的生產(chǎn)包括膠體金及膠體金標(biāo)記抗原或抗體的制備，膠體金標(biāo)記的包被，檢測(cè)線及質(zhì)控線的制備，膠體金標(biāo)記物、包被抗原或抗體等濃度確定，各種工作溶液的配置等步驟，并通過(guò)產(chǎn)品的半成品檢定和成品檢定兩個(gè)質(zhì)控過(guò)程來(lái)完成。

（一）膠體金標(biāo)記物的制備

采用枸櫞酸三鈉還原法或其他方法制備膠體金，膠體金顆粒大小應(yīng)符合規(guī)定，膠體金標(biāo)記物在510~550nm波長(zhǎng)處應(yīng)有最大吸收值，置2~8℃保存，應(yīng)在規(guī)定的保存期內(nèi)使用。采用合適的方法確定膠體金標(biāo)記物、包被抗原或抗體工作濃度，將工作濃度的膠體金標(biāo)記物吸附于玻璃纖維或聚酯纖維膜上。

（二）檢測(cè)線及質(zhì)控線的制備

取已確定使用濃度的相關(guān)抗原或抗體，在硝酸纖維素膜上制備檢測(cè)線，應(yīng)用同樣方法制備質(zhì)控線，根據(jù)生產(chǎn)工藝在規(guī)定的溫度、濕度條件下干燥，置規(guī)定的濕度（通過(guò)驗(yàn)證方法確定相對(duì)濕度要求）條件下存放。檢測(cè)線與質(zhì)控線應(yīng)具有間隔距離要求，應(yīng)對(duì)所用的金標(biāo)記用玻璃纖維及硝酸纖維素膜等進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)，如尺寸、外觀、包裝及吸附性能等，并記錄批號(hào)、數(shù)目、標(biāo)識(shí)，不同批號(hào)的玻璃纖維及硝酸纖維素膜應(yīng)當(dāng)不要混用了。

（三）貼膜、切割、裝袋

貼膜、切割及裝袋應(yīng)在具有濕度（通過(guò)驗(yàn)證方法確定相對(duì)濕度要求）要求條件下操作，切割的膜條應(yīng)有寬度要求。

四、質(zhì)量控制

用于半成品及成品質(zhì)量控制的質(zhì)控品包括靈敏度、特異性、均一性等指標(biāo)，如具有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品或參考品的產(chǎn)品應(yīng)使用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）或經(jīng)標(biāo)化質(zhì)控品進(jìn)行檢定。

（一）半成品質(zhì)控品

1、半成品抽樣

檢驗(yàn)人員按批號(hào)抽取規(guī)定數(shù)量的半成品，作號(hào)標(biāo)記，待檢。

2、半成品檢定

對(duì)所抽樣的半成品做靈敏度、特異性、均一性等試劑盒性能方面的檢測(cè)，應(yīng)符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

（二）成品質(zhì)控品

1、物理檢查

應(yīng)進(jìn)行外觀是否平整，材料附著是否牢固，液體移行速度，膜條寬度等物理檢查，應(yīng)符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

2、性能方面的檢測(cè)

靈敏度、特異性、均一性等試劑盒性能方面的檢測(cè)，應(yīng)符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。