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PCR擴(kuò)增的重要標(biāo)準(zhǔn)

什么是PCR實驗的靈敏度?
靈敏度指的是PCR擴(kuò)增反應(yīng)能夠檢測到目的基因的最小值.研究結(jié)果表明,影響PCR擴(kuò)增效率的因素,如模板的復(fù)雜程度與完整性、引物的純度及其與模板的結(jié)合效率、反應(yīng)溫度、DNA聚合酶的熱穩(wěn)定性與擴(kuò)增性能、反應(yīng)緩沖液的離子組成（主要指陽離子）、反應(yīng)優(yōu)化劑等等,都決定了PCR實驗的檢測靈敏度.在最佳的擴(kuò)增條件下,常規(guī)PCR反應(yīng)能夠檢測到的pg(10-12g)數(shù)量級的目的基因.對于一個特定的目的基因而言,模板與引物通常都是已經(jīng)限定好的因素.因此,選擇什么樣的PCR反應(yīng)體系（包括DNA聚合酶與反應(yīng)緩沖液等）就是研究者提高PCR實驗靈敏度的關(guān)鍵因素了.
與實驗室自配的PCR擴(kuò)增體系相比,東盛的Taq Mix對反應(yīng)緩沖液中的成分進(jìn)行優(yōu)化,并加入了適當(dāng)比例的反應(yīng)增強(qiáng)劑（PCR Enhancer）,提高了DNA聚合酶的熱穩(wěn)定性,顯著降低模板的二級結(jié)構(gòu)對PCR擴(kuò)增性能的影響,使得DNA聚合酶處于最適活性狀態(tài),從而獲得了比自配體系更高的檢測靈敏度.即時反應(yīng)體系中只有幾個目的基因的拷貝,也能輕松檢測.
什么是PCR實驗的特異性？
特異性指的是在PCR擴(kuò)增過程中,專一性地擴(kuò)增目的片段而非其他片段的性能.在PCR實驗本身的靈敏度很高,且實驗條件未充分優(yōu)化的情況,通常會在目的片段出現(xiàn)的同時伴隨有其他的雜帶,即發(fā)生非特異性擴(kuò)增的現(xiàn)象.模板、引物性質(zhì)及質(zhì)量、反應(yīng)條件的控制等均會影響PCR擴(kuò)增的特異性.近年來的研究結(jié)果表明,緩沖液的品質(zhì)（如離子種類與組成,反應(yīng)優(yōu)化劑等）對保證PCR的特異性擴(kuò) 增起著不可忽視的作用.一般的緩沖液中調(diào)節(jié)氫鍵作用的鹽只有KCl,而東盛HSTM TaqMix的緩沖體系通過反應(yīng)優(yōu)化劑以及KCl/(NH4)SO4鹽離子體系的平衡調(diào)節(jié),顯著提高了PCR擴(kuò)增的特異性,降低背景.
PCR實驗的靈敏度與特異性是一對此長彼消的特性,這也決定我們實驗體系調(diào)節(jié)實際就是找到適合實驗的靈敏度與特異性的平衡點.由于PCR體系中的眾多成分,使得組合較多,篩選工作繁雜.東盛基于靈敏度與特異性分別設(shè)計了PCR Mix和HS Taq Mix,幫您確定大的平衡點,如果您需要更細(xì)致的平衡點,請選擇相應(yīng)的Mix Kit系列進(jìn)行微調(diào).